质粒DNA提取实验-碱解法
质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。
提取质粒的基本步骤分为三步：
①细菌的培养和质粒的扩增
②细菌菌体的裂解
③质粒DNA的纯化
一、材料与试剂准备
1. 材料：大肠杆菌。
2. 仪器：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，台式离心机，取液器一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪。
3. 试剂：
（1）Solution I ：25 mM Tris-Hcl(pH7.4)，10 mM EDTA(pH8.0)，50 mM葡萄糖，高压灭菌，4℃保存。
（2）Solution II ：0.2 M NaOH， 1%SDS 现配现用。
（3）Solution III ：5 N KAc pH4.8，高压灭菌，4℃保存。
（4）3 M NaAc pH5.2，高压灭菌，4℃保存。
（5）异丙醇，溶菌酶（8 mg/ml），酚/氯仿，无水乙醇，70%乙醇，LB培养基，电泳试剂。
二、操作步骤
1. 细菌繁殖：LB培养基，2 ml/20 ml，37℃，200 rpm，摇一摇，过夜。
2. 离心10 min，5 000 rpm， 4℃；弃上淸液。
3. 沉淀（菌体细胞）预冷的TES缓冲液洗涤，离心10 min，5 000 rpm， 4℃，加入预冷的1 ml Solution I，冰浴10 min。
4. 重新悬浮，加入150 ul溶菌酶母液，室温放置5 min。
5. 加入1.2 ml Solution II， 冰浴5 min。
6. 加入0.9 ml预冷乙酸钾，混匀，离心10 min，12 000 rpm，4℃。
7. 加入1.5 ml异丙醇，-20℃冰箱内放置15 min。
8. 离心10 min，12 000 rpm，4℃。
9. 取沉淀，悬于400 ul TE缓冲液中。
10. 加入40 ul，3 M NaAc。
11. 酚/氯仿，抽提，乙醇沉淀。
12. 离心10 min，12 000 rpm，4℃。
13. 取沉淀，冷冻干燥，再悬浮于50 ul TE缓冲液中。
14. 电泳检测提取DNA的质量。
