定点诱变实验-利用PCR引物点突变



1.  制备模板（见基本方案，步骤1和2）
 
2.  合成和纯化寡核苷酸引物并对5‘端磷酸化。
 
3.  扩增模板DNA（基本方案，步骤4和5），在最后一次延伸结束后，加5 U 的klenow酶，30℃保温15 min。

4.  分析并处理反应产物（基本方案1，步骤6和7）。

5.  取所得扩增片段的一半量用侧翼序列内的限制性内切酶切割，低熔点琼脂糖凝胶电泳 纯化酶切片段。
 
6.  将两个扩增的片段通过平末端连接亚克隆入合适的载体。

7.  按基本方案1，步骤10、11进行。
 

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