磷酸钙介导的真核细胞转染实验-磷酸钙法
磷酸钙沉淀的形成
1. 在转染前一天将细胞分入10 cm 组织培养平板中。当被转染的细胞是贴壁细胞，倍增时间为18~24 h时，一般按1：15从长满的培养皿中分细胞效果较好，转染的当天，细胞应在培养皿中很好地分散分布。在加入沉淀前2~4 h，用9 ml 完全培养液培养细胞。
2. 将要转染的DNA用乙醇沉淀，空气中晾干沉淀。将DNA沉淀重悬于450 μl 无菌水中，加50 μl 2.5 mol/l CaCl2。
3. 加500 μl 2×HeBS于一无菌的15 ml 锥形管中，将机械式移液器安上1 ml 吸头， 一边吹打2XHeBS，一边用巴斯德吸管逐滴加入DNA/CaCl2溶液，随即在漩涡混合器上振荡5 s，将其在室温下静置20 min 以形成沉淀。
4. 将沉淀均匀加入10 cm 平板的细胞中，轻轻晃动。
5. 在标准生长条件下培养细胞4~16 h，除去培养液，用5 ml 1×PBS洗细胞2次，加 10 ml 完全培养液培养细胞。
6. 对于短暂分析实验，可在既定的时刻收集细胞。对于稳定转化，让细胞生长两个倍增时间后分入培养皿中进行选择培养。
