还原糖含量测定-用斐林试剂热滴定法
斐林试剂由甲、乙两种溶液组成。甲液含有硫酸铜和次甲基蓝;乙液含有氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。混合时,硫酸铜与氢氧化钠起作用生成蓝色氢氧化铜沉淀,而酒石酸钾钠在碱性溶液中使沉淀的氢氧化铜溶解而成络合物。络合物与还原糖共热时,两价铜被还原为一价氧化亚铜(红色沉淀),再与试剂中亚铁氰化钾反应生成可溶性化合物而不复析出。斐林试剂中两价铜被还原完毕后才能使次甲基蓝还原为无色,故次甲基蓝在此作为指示剂。
溶液配制: 1. 斐林试剂甲液:称取15 g硫酸铜,0.05 g次甲基蓝溶于蒸馏水中并定容至1 L。
2. 斐林试剂乙液:50 g酒石酸钾钠,54 g氢氧化钠,4 g亚铁氰化钾溶于蒸馏水中并定容至1L。
3. 6 mol/L盐酸:量取浓盐酸500 ml加蒸馏水至1 L。
4. 6 mol/L氢氧化钠:称取氢氧化钠240 g溶于蒸馏水至1 L。
5. 标准葡萄糖溶液(0.1%):精确称取葡萄糖(在105 ℃干燥至恒重)1 g溶于蒸馏水中并定容至1 L。
操作步骤:
1.空白管测定:取斐林试剂甲、乙液各5 ml,置250 ml三角瓶中,由滴定管加适量0.1%标准葡萄糖溶液,在电炉上加热至沸,然后以4~5 s一滴的速度继续自滴定管中加入标准葡萄糖溶液,滴定至蓝色消失,记下总共所消耗的葡萄糖体积(A)。
2.样品测定:6~7 ml待测样品溶液(含糖量在3~4 mg/6~7 ml),加斐林试剂甲、乙液各5 ml,置250 ml三角烧瓶中,同空白测定一样操作,记下所耗标准葡萄糖体积(B)。
3.计算: