绿豆根形成法测定生长素类物质的浓度或效价
生长素即可促进胚芽鞘与茎的伸长及果实的发育,也可促进根的形成。在一定浓度范围内,根形成的数目随浓度成正比地增加,浓度过高则起抑制作用。用标准生长素溶液来作对比时,就可测出某一类似生长素的效价或某一提取液中内源生长素的浓度。
一、材料和设备
绿豆种子
培养室(700-750米烛光),温箱,搪瓷盘,烧杯,刀片,刻度吸管,培养皿,镊子,石英砂。
50pp M IAA溶液:称取IAA5毫克,溶于水中(微微加热),在100 ml 容量瓶中定容至刻度。摇匀,贮冰箱中待用。
二、实验步骤
(1)绿豆幼苗的培养:将绿豆种子用约80度热水浸种,当水冷却到室温后,继续浸泡两小时,使种子充分吸胀。然后将种子放在垫有湿润滤纸的培养皿中,于25℃恒温箱内使其萌发,24小时后,挑选萌发整齐的绿豆幼苗,播种在湿润的石英砂中,放在25℃左右,光照为700-750米烛光下培养到7-10天时,绿豆幼苗已具有一对展开的真叶与三片复叶的芽,就可供制备切段以作试验之用。
(2)幼苗切段的制备:选生长整齐的绿豆幼苗,用刀片由幼苗子叶节下3厘米处切去根系,如果子叶没有脱落则将子叶也去掉。此时切段带有3厘米长的下胚轴,第一对真叶及复叶,芽(见图9)。试验前将制备好的切段浸泡在水中以免切口风干。
(3)取50毫升烧杯6只,用玻璃铅笔编号,于第一只烧杯中倒入50pp M IAA溶液50 ml 吸出5 ml移入第2号杯中,再于2号杯中加入45 ml 蒸馏水,用玻璃棒搅匀,即成5pp M 的溶液,如此逐级释放直到第5号杯中配成005pp M吲哚乙酸,并从中吸出5cm 3弃去为止,于第6号杯中加45 ml 蒸馏水作对照,各杯均在杯外壁划线记下液面高度,各杯溶液溶度如下:每一烧杯中插入准备好的绿豆苗切段5或10段,将子叶节浸入液面以下。每24小时加一次蒸馏水使保持原来的溶液体积。7天后,计算每个切段所长的根数。可以看到,根的数目随一定范围内生长素浓度的增加而增加。
烧杯号123456
IAA (pp M )5050.50.050.0050.00
图5生长素生物鉴定用的绿豆切段
1.复叶 2.真叶 3.上胚轴 4.下胚轴
(4)标准曲线的绘制:以生长素溶液浓度的对数作横坐标,以生长素溶液及蒸馏水中发根数之比值(L/L)。作纵坐标,绘制出标准曲线。
(5)末知样品浓度或效价的测定:若有末知浓度的生长素提取液或末知效价的类似生长素溶液,需要进行测定时,均可依上法求L/L,然后和标准曲线比较,即可求得浓度或效价。