植物根系伤流液中氨基酸总量的测定实验
氨基酸与水合茚三酮作用后,能产生二酮茚-二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物,其颜色的深浅与氨基酸的含量成比例。测定反应产物在520nm波长处的吸光度值 ,即可计算出样品中氨基酸的含量。
一、材料仪器设备及试剂
1.材料:根系伤流液。
2.仪器设备:分光光度计,加热设备,试管,试管架,移液管,洗耳球。
3.试剂及配制:95﹪乙醇。
50μg· ml-1谷基酸氮标准母液:准确称取谷氨酸52.52 mg ,溶于100 ml 10﹪异丙醇溶液中。
3﹪水合茚三酮:称取水合茚三酮3g, 溶于100 ml 95﹪乙醇中。
二、实验步骤
1. 谷氨酸氮标准曲线制作
(1)取6支试管,编号,按下表配制每管含量为0~25μg的谷氨酸氮标准液。
加入表中试剂后,摇匀,置于沸水浴中准确加热10min,溶液变为蓝色,表示有氨基酸存在,取出后各管立即加入5 ml 95%乙醇,摇匀,冷却后以0号管溶液作空白对照,于520nm波长下测定吸光度(A)值。
(2)标准曲线绘制
以1~5号管谷氨酸氮含量为横坐标,吸光度(A)值为纵坐标,绘制标准曲线。
2. 伤流液中氨基酸含量的测定
取3支试管(三个重复),编号,各加入伤流液0.5 ml,蒸馏水1 ml,3﹪水合茚三酮溶液0.5ml,摇匀,置于沸水浴中准确加热10min后,取出各管立即加入5 ml 95%乙醇,摇匀,冷却后以标准曲线0号管溶液作空白对照,于520nm波长下测定吸光度(A)值。
三、结果计算
根据样品管的吸光度值,从标准曲线上查出相应的谷氨酸氮含量,三个重复求平均值代入下列公式计算伤流液中氨基酸含量。