有丝分裂是植物细胞分裂，体细胞增殖的主要方式，在有丝分裂过程中，细胞核内染色体准确地复制，并有规律地，均匀地分配到两个子细胞中，使子细胞和母细胞具有同样数目和形态结构的染色体，保证了植物细胞的遗传性状的一致。各种生长旺盛的植物组织中，如根尖组织，茎尖组织，居间分生组织，愈伤组织等，细胞常进行着旺盛的有丝分裂。在细胞分裂的适当时期取材，通过对供试材料进行一定的处理，就可以在显微镜下观察染色体的变化特点和染色体的形态特征，并进行染色体计数。 由于在有丝分裂的中期染色体具有典型的形态特征，并易于计数，因此为了获得更多的中期染色体图像，可以采用药物处理或冰冻处理的方法，阻止纺锤体的形成，使细胞分裂停止在中期。同时通过处理还可使染色体缩短，易于分散，便于进行观察研究。另外，通过对细胞组织进行酸性水解或酶处理除去细胞之间的果胶层，并软化细胞壁，使细胞容易彼此散开，有利于压片和染色。

1．取材：可在室内培养根尖，也可以直接从田间挖取刚长出的幼嫩根尖。室内培养的方法是：

（1）圆葱和大蒜根尖：发根前先将圆葱以根部向上在光下晒两天，然后置于盛清水的小烧杯口上，使根茎部与水接触,或将圆葱半埋于湿沙内。在20～25℃光照条件下培养2～3天，待根长1～2cm时，选健壮根自尖端约1cm处剪下备预处理用。大蒜作材料可先将蒜瓣扒去皮，然后用细铁丝串起放在盛清水的培养皿内培养，其它要求同上。剪取根尖的时间以上午10时左右为好。

（2）玉米（或黑麦，小麦，蚕豆）根类：先将种子浸泡一天，待吸水膨胀后再转移到铺有几层滤纸（或吸水纸）的培养皿内，加水湿润，然后将种子均匀地摆放在滤纸上，盖上盖。放在18～20℃黑暗条件下培养，待根长到1～2cm时，选健壮根尖于上午10时左右取下备用。

田间从植株上直接取根的方法适用于大部分禾本科植物，例如在麦类作物生长季长出的大量不定根，比种子萌发的根更健壮，是观察有丝分裂的很好材料。

2．预处理：为了阻止纺锤体的活动，获得更多的中期分裂相，同时使染色体相对缩短，便于染色体分散和计数，可对根尖进行预处理。如果只是为了观察有丝分裂各期染色体动态，可以不进行预处理。

预处理的方法有冰冻预处理和药物预处理两种。

（1）冰冻预处理：将根尖浸泡在蒸馏水中，置于1～4℃冰箱内或盛有冰块的保温瓶中冰冻24小时。这种方法对染色体无破坏作用，染色体缩短均匀，效果良好，简便易行，各种作物都适用。

（2）药物预处理：常用的药物有0.05～0.2%秋水仙素溶液，饱和对二氯苯溶液，0.002mol/L 8－羟基喹啉等。预处理时，将根尖直接浸泡在药液中，在适宜的温度下处理一定的时间（表1）。这些药物都能使染色体缩短，但同时对染色体也有一定破坏作用。使用时应注意处理的时间，小麦，黑麦，大麦，圆葱和大蒜等处理4小时左右，棉花和水稻等处理2小时左右。处理的时间长短同温度有很大关系。

3．固定或前低渗：固定的目的是利用化学药品将生活细胞迅速杀死，并使构成染色体的核蛋白变性和沉淀，以保持染色体的固有形态和结构。固定液一般采用卡诺氏固定液，配配制方法为无水酒精：冰醋酸＝3：1，也可用95％ 乙醇代替无水乙醇。

操作时将预处理后的根尖用蒸馏水冲洗两次（约5分钟），然后转移到卡诺氏固定液中。在4～15℃条件下固定20～24小时，即可进行观察。如果需要长期保存，可先用70%酒精冲洗2次然后转入70%酒精中保存。

4．解离：解离的目的是使细胞壁之间中层的果胶物质以及部分细胞质分解，而使细胞易于分散。同时也可使细胞壁适度软化而易于压片。解离的方法主要有以下几种。

（1）将根尖用蒸馏水冲洗2次，然后放入已经在60℃水浴锅中预热的1mol/L盐酸中。在60℃恒温条件下处理10～15分钟，当根尖透明呈米黄色时取出。

（2）将根尖置于95%酒精和浓盐酸的等量混合液中处理2～10分钟。或将根尖放在5ol/L盐酸内处理5～10分钟。

（3）将根尖置于2.5%果胶酶和2.5%纤维素酶等量混合液中（PH 5～5.5），在室温18～28℃条件下处理2～3小时。

5．后低渗：将根尖放在蒸馏水中冲洗2～3次（约10分钟）。酶解后的根尖可浸泡10分钟，然后再冲洗一次。根尖一定要冲洗干净，否则影响染色。低渗后的根尖放入70%酒精中备用。

6．染色与压片：染色与压片的方法常用的有以下几种。

（1）醋酸洋红染色法：取一根尖放在吸水纸上吸去多余的保存液，然后放在一张干净的载玻片中央。用刀片将根尖分生组织切下，将其切成薄片（越薄越好），滴1滴2% 醋酸洋红染色液，盖上盖玻片，进行压片。压片时用一手固定盖玻片，另一手用镊尖或解剖针柄轻敲盖玻片，使材料溃散。用火轻烤载玻片背面，然后继续轻敲，待材料呈云雾状即可镜检。加热的目的是使染色体充分染色和软化，以及破坏细胞质的染色。如发现有较理想的分裂相，可再轻烤一下片子，然后在盖玻片上盖一张吸水纸，用大拇指用力压片（不可使盖玻片移动），然后镜检。

也可以采用十字交叉压片法。即：取根尖放在吸水纸上吸去多余的保存液，然后放在干净的载玻片中央。用刀片将分生组织切下，将其切成薄片。取另一张干净的载玻片，呈十字形交叉盖在放有材料的载玻片上。在载玻片上盖一张吸水纸，并用大拇指压片，使材料压成一薄层。然后将两载玻片分开，各滴加1滴染色液进行染色。稍停片刻后加上盖玻片，在酒精灯上轻烤一下片子，一手固定盖玻片，另一手用铅笔橡皮头对准材料轻轻敲打，使根尖细胞分散均匀。

（2）改良卡宝品红染色压片法：将根尖置于干净的载玻片中央，切下根尖分生组织，将其切成薄片，滴一滴改良卡宝品红染色液，盖上盖玻片压片。。

（3）铁矾苏木精染色压片法：先将根尖放入4%铁矾水溶液中媒染2～4小时。然后流水冲洗20分钟，再将根尖放入0.5%苏木精染液中避光染色40～120分钟，取出后放入蒸馏水中备用。其制片方法，取一染色后的根尖放在干净载玻片的中央。用刀片将根尖分生组织切下，将其切成薄片（越薄越好），滴1滴45%冰醋酸，加盖玻片，具体压片方法同上。

7．镜检：压好的片子先在低倍镜下镜检，找到分裂细胞后转换高倍镜观察。如果染色体分散较好，图象清晰，就可以脱水封片，制成永久片。