培养细胞染色体显示法实验-传代培养细胞染色体显示法
培养细胞有来源易得、细胞分裂率高和制出标本清晰度高等优点，是制备染色体极好的对象。
一、讨论
1. 染色体制备过程是既易又难的方法；易在要求条件简单、操作不复杂繁锁，易于获得结果。
2. 难在制备出的标本不总是非常理想和一致，常出现分裂相数少、染色体分散不良、或染色体过短等，为此在初做时，应试做预试验，摸清诸条件，能提高成功率。
1. 培养细胞
取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80 %～90 %汇合单层培养细胞；
2. 加秋水仙素
使用最终浓度为0.02～0.8 μg/ml营养液；温箱继续培养6～10 小时；
或用低温封闭法：把培养细胞置于4 ℃条件下6～12 小时后，再于37 ℃ 温箱中继续培养6～10 小时处理（加秋水仙素）；
3. 采集分裂细胞
可利用分裂中期细胞体变圆与底物附着不牢特点，此时手持培 养瓶，左右反复横向水平摇动，令培养液在培养细胞表面反复冲涮；应用此法 可使90 %的中期分裂细胞从瓶壁脱落；注意勿用力过猛，以防多量非分裂细胞脱 落影响观察；
4. 离心
收集培养液，1000 转/分钟，离心5～10 分钟；
5. 低渗处理
吸除上清液、加入预温至37 ℃的0.075 M KCl溶液，在温箱中静置 20～30 分钟；
6. 预固定
向悬液中加新鲜1：3醋酸、甲醇固定液1 ml，用吸管吹打调匀；此措 施能起到先使细胞表面轻微固定，可防止固定后细胞粘连成块；
7. 固定
离心，同4，吸除上清液，加新鲜固定剂5～10 ml；加固定剂时要用一 手微斜持离心管，另手用吸管吸取固定剂，把固定剂逐滴滴在离心管壁上，使 之慢慢流入离心管中，然后轻轻吹打均匀，置15～20 分钟；
8. 重复7，末次离心后，小心吸除大部上清，据悬液中细胞密度大小，余下固定 液0.5～1 ml；
9. 制片
用滴片法制片，按如下步骤：彻底洗净载物片，勿留任何油脂，置冰箱中 储存备用。滴片前现从冰箱中取出冷载物片1 张，在载物片表面出现细微水气 时，立即向片的一侧滴2～3 滴细胞悬液（如固定液不散，可能因载物片未洗净 或不冷所致），滴片时的距离能保持半米高度才好。滴片后置室温中令其自然干 燥，或用吹风机热风吹干亦可。如此制备好的标本可置盒中备用（做显带或荧光观察等）或立即进行染色观察；
10. 染色和封片
一般常用Giemsa染色；取干液Giemsa1 份加pH6.8磷酸缓冲液 9 份混合，染色10 分钟后，水洗、晾干、可直接观察（适用油浸镜）；如标本需 要保存或做长时间观察，可过二甲苯两次后，用中性树胶封片（或先迅速过丙 酮两次，每次30 秒）后，再过二甲苯，然后封片亦可。
