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一、材料
无菌
1. 活检标本
2. 1.2 ml 塑料冻存管（Nagle Nunc）
3. DBBS
4. 收集液
5. 二甲基亚砜（如果放在一个无菌容器中，为半灭菌的）
6. 器皿（解剖刀、解剖镊、培养皿等，同为原代培养）
二、操作步骤
1. 除去坏死组织、脂肪和纤维组织后，将肿瘤切成约 1~2 mm 的小块。同原代培养，将肿瘤块放入 DBBS 中浸洗。
2. 在每个冻存管中放入 4 或 5 个肿瘤块。
3. 将 1 ml 含有 10%DMSO 的生长培养液加入到放有肿瘤块的冻存管中，在室温下放置 30 min。
4. 将冻存管按 1°C/min 冷冻（见方案 20.1），然后将冻存管移入液氮罐。为了避免爆炸危险，不要将冻存管浸入液氮。
5. 将冻存管放在 37°C 温水中，使其融化（要有适当的预防措施，见方案 20.2）。
6. 用乙醇将冻存管彻底擦拭后打开，使肿瘤块沉淀后，吸出一半培养液。
7. 缓慢补充不含 DMSO 的新鲜培养液，轻轻摇动混合后，放置 5 min。
8. 用不含 DMSO 的培养液逐渐置换全部的培养液，然后将肿瘤块移入 Petri 培养皿，按常规原代培养方法进行操作，但每培养瓶中放入两倍多细胞。
