碱性磷酸酶染色实验

细胞组织中的碱性磷酸酶在碱性(PH9.0-9.6)环境下使作用液中的底物(a一磷酸萘酚钠)水解,产生出a萘酚,然后再与偶氮盐偶联,生成不溶性的耐晒染料(最终产物的颜色因所用偶氮盐的品种不同而有所不同).
一、实验试剂:底物作用液的配制:α-磷酸萘酚钠35mg,偶氮盐(FastGsrnet)35mg,0.05M丙二醇(Propcmeliul)缓冲液35ml,配成后可直接过滤到涂片上。

二、实验方法:

l. 涂片在冷的(0土5℃)10%福尔马林甲醇液中固定30秒.

2. 蒸馏水冲洗.

3. 往涂片上滴加底物作用液,在室温下作用5-10分钟。

4. 自来水冲洗10分钟.

5. 2%甲绿复染10分钟。

6. 水洗,晾干、封固(用甘油)

三、实验结果判断:NAP阳性颗粒为红色,可采用表内评分,根据100个中性粒细胞胞浆内NAP颗粒的多少进行0-4+计分,再将100个细胞分值相加,即得总积分值,注意,只限于成熟的带形及多形核中性粒细胞,不计淋巴细胞,嗜酸性和嗜碱性粒细胞。



注:·指偶氮染料沉积所占细胞浆的百分比

附注:

1. 涂片应新鲜,厚薄适宜,及时固定.

2. 染色液应新鲜配制,注意PH值应以9.4为好.

3. 每次染色时,最好同时做1份化脓性感染患者血涂片作阳性对照,同时报告待检者和对照者阳性细胞率和积分值.
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