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用碱和SDS处理可以从中度规模(20-50ml)的细菌培养物中分离质粒DNA。
1. 挑取转化后的单菌落，接种到10ml含有适当抗生素的LB中，于37度剧烈振摇下培养过夜。
2. 将培养物转移到一个15ml的试管中，于4度以2000g（4000r/min）离心10min后收集细菌。
3. 用轻缓抽吸的方法，尽可能吸干培养液。
4. 将细菌沉淀重悬于200ul冰冷的碱裂解液I中，剧烈震荡，将悬浮液转移到微量离心管中。
5. 加400ul新配置的溶液II到每细菌悬液中，盖紧管口，快速颠倒离心管5次，以混合内容物，不要用涡旋振荡，将离心管放置于冰上
6. 加300ul冰冷的碱裂解液III，盖紧管口，反复颠倒多次，使之在粘稠的细菌裂解物中分散均匀，然后将离心管置于冰上3-5min
7. 用微量离心机于4度以最大转速离心5min,转移600ul上清到一只洁净的离心管中。
8. 加等体积的酚：氯仿，通过剧烈振荡混合有机相和水相，然后用微量离心机于4度以12000转离心2min,将上层水相转移到新的离心管中
9. 在室温下加600ul异丙醇以从上清中沉淀核酸，剧烈振荡混合溶液，于室温下放置2min。
10. 用微量离心机于室温度以最大转速离心5min，收集核酸沉淀。
11. 小心吸去上清，将离心管倒置于纸巾上，使所有液体流干。
12. 加1ml 70%的乙醇于沉淀中并将盖紧的试管颠倒数次，室温下12000转离心2min.
13. 再次轻轻吸去上清，要十分小心，因为质粒沉淀粘贴不牢。
14. 开口试管置于室温，让酒精挥发完毕。
15. 用100ul含有去DNA酶的RNase A(胰RNA酶)(20ug/ml)的TE重新溶解质粒沉淀，存储于-20度。
