2.1.2 哺乳动物细胞总RNA快速分离
尤钙镁离子磷酸缓冲盐溶液 (PBS) 10 mmol/L EDTA (pH8.0 ) 0.5% S DS 0. lmol/L 乙酸钠（pH 5.2 ) 水平衡的苯酚 乙醇 l mol/L Tris-Cl (pH8.0 ) 5mol/L NaCL
1 ) 吸出培养液，用 7m l 冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲盐溶液 ( PBS) 冲洗细胞培养皿
内的单层细胞，重 复1 次.操 作 时 ，应将平板置于冰上，直至所有单层细胞冲洗完毕。
2 ) 每个直径 90mm 培 养[IIL中加 2ml 10mmol/L EDTA(pH8.0 ) 、0. 5% SDS，用刮棒
将裂解物刮人一次性使用的 15m l 离心管中。
3 ) 用 2ml 0. 1mol/L 乙酸钠 （pH5. 2 )、10mmol./L EDTA( PH8. 0 ) 冲洗平板，并将冲
洗液移至上述装有细胞裂解物的离心管屮。
4 ) 将 4m l 水平衡的苯酚，于室温振荡 2mm，使之与细胞裂解物混匀，则细胞 DNA 形
成白色丝状沉淀。
5 )于4 ℃ 以 5000r/ mm 离 心 10mm 分 相 ，两相之间可见致密的 DNA 层 。
6 ) 用一支巴斯德吸管将上层 (水相）移至另一个 装 有 440u1 冰 预 冷 的 lmol/L Tris-Cl
( pH8. 0) 和 180ul 5mol/L NaCl 的离心管中。
7 ) 加 2 倍体积冰预冷的乙醇，混 勻 ，于 0°C放 置 至 少 30min
8 ) 于 4°C 以 5000r/m im 离 心 lOmin 以 沉 淀 RNA，弃去乙 醇 ，离心管直立倒置直至所
有乙醇挥发殆尽。
9 ) 用200ul冰预冷的TE（pH8. 0 )重溶 RNA, 将其移至一个灭菌的微量离心管内，并
加5mol/L NaCl、50(V 丨冰预冷的乙醇，
1 0 ) 用微量离心机于 4°C 以 12000 足离心 5min 以 收 集 RNA,
11)吸出所有 的乙 醇 ，将打开管盖的离心管置于实验台上放几分钟，让最后残留的痕
量乙醇挥发殆吊。
1 2 )用所需缓冲液重溶 RNA。
