5% Triton X-100 匀浆缓冲液：50 mmol/L NaCl,50 mmol/L Tris-Cl, ( PH7.5), 5 mmol/ L EDTA (pH 8 .0) , 0.5% SDS ,200 ug/ml 蛋甶酶 K 酚 ：氯 仿(1 : 1 ) 3 mol/L 乙酸钠 (pH 5.2 )。 乙醇 8 mol/L 氯化锂
1 ) 将 待 处 理 的 组 织 放 置 下 一 个干烤 过 的 玻 璃 匀 浆 器 内 ，弃 去无关 的 液 体 ，用 0. 5%
Triwn X-100 洗 涤 蝇 胚 ，以 去 除 培 养 基 。
2 ) 加 1 0 倍 体 积 的 匀 浆 缓 冲 液 、立 即 研 磨 使 组 织 彻 底 匀 浆 化 。
3 ) 于 37℃ 将 组 织 匀 浆 温 育 lh , 间 或 混 匀 之 。
4）将 匀 浆 移 至 离 心 管 内 ，加 等 体 积 酚 ：氯 仿（1 : 1 ) ，剧 烈 振 荡 1 min， 用吊 桶式 转
头 于 室 温 以 5000 g 离 心 l 0 mim, 使 水 相 和 有 机 相 分 开 。
5 ) 将 上层 水 相 移 至 另一离 心 管 内 . 按 步 骤 4 用 酚 ：氯 仿（1 : 1) 再 抽 提 1 次 。
6 ) 将 水 相 移 至 为 - 管 内 ，加 0 .1 体 积 3mol/ L 乙 酸 钠 ( PH 5. 2 ) ，混 匀 ，加 2.5 倍体积
冰 预 冷 的 乙 醇 ，冰 浴 2 h
7)于 4° C 以 5000 g 离 心 l5 min，小 心 去除 上淸 液 ，室 温 晾 下 RNA 沉 淀 . 少 量 水 溶 解
RNA, 加 3 倍 体 积 乙 酔 ，于 —70℃ 储 存 备 用 。如 要 除 去 糖 蛋 白 和 卵 黄 物 质 ，则可根据 需 要
逬 行 步 骤 8 ) 〜 11)
8) 用少量水重溶 RNA 沉 淀 ，加 等 体 积 经 髙 压 灭 菌 的 8mol/ L 氯 化 锂 ，混 匀 ，一 20℃
放 置 3 h 以上。
9 ) 于 4℃ 以 10000g 离 心 30 min 沉 淀 RNA, 小心弃上清。
1 0 ) 用 70% 乙醇洗涤沉淀，离心片刻，弃 去上清液. 于空气中晾干核酸沉淀。
1 1 ) 用少量水重溶 RNA, 加 3 倍体积乙醇，于一 70℃ 储存备用。
注意事项
1 ) 用氯化锂沉淀 RNA 从而有助于去除糖蛋白和卵黄物质
2 ) 由 于 此 方 法 分离的 RNA 量大 超 过 污 染 的 DNA 量 ，因此不必除去制品中的
DNA。尽管污染的基因组 DNA 序列不干扰杂交和翻译，但如果此 RNA 用于 构建 cDNA
文库，则这些 DNA 可能会引起混乱，在这种情况下吋用无 RNA 酶的 胰 DNase I 进行消
化 ，以去除污染的 DNA。
