枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备实验-化学改进法
用GM I和GM II溶液处理枯草芽孢杆菌野生型菌株BS501a，用改进的方法制备感受态细胞。
一、实验材料准备
1. 枯草芽孢杆菌感受态制备用贮存液
（1）10×Spizizen salts母液： 15% K2HPO4·3H2O，6% KH2PO4，2% (NH4 ) 2 SO4，0.2% MgSO4，1% 柠檬酸钠，溶于蒸馏水中，6.6 ×104 Pa高压灭菌，室温贮存。
（2）10% 酵母粉、1% 水解酪蛋白和25 mmo l /L MgCl2， 6.6 ×104 Pa高压灭菌， 酵母粉溶液最好现用现配，水解酪蛋白和
MgCl2溶液可室温贮存；20%葡萄糖、0.25% 所需氨基酸和0.1 mo l/L CaCl2，用0.22 μm的微孔滤膜过滤除菌，葡萄糖溶液和CaCl2
溶液室温贮存， 氨基酸溶液- 20℃ 贮存。
2. 枯草芽孢杆菌感受态制备用培养基
（1）GM I：1mL 10 ×Spizizen salts， 0.1 mL，10% 酵母粉，0.25 mL 20% 葡萄糖，0.2 mL 1% 水解酪蛋白，0.2 mL 0.25%所需氨基酸，补充灭菌蒸馏水至总体积10 mL。
（2）GM II：1 mL 10×Spizizen salts，0.05 mL10%酵母粉， 0.25 mL 20% 葡萄糖，0.04 mL 1% 水解酪蛋白，0.2 mL 0.25%所需氨基酸， 0.05 mL 0.1mo l/L CaCl2， 1 mL 25 mmo l/L MgCl2， 补充灭菌蒸馏水至总体积10mL。
二、实验步骤 1. 挑取一新鲜培养的野生型枯草芽孢杆菌菌株BS501a菌落接种于2.5 mL GMI培养基中，30℃，130-150 r/min振荡培养过夜。
2. 将过夜培养物按10%接种量接种于2.5 mL新鲜的GM I中，37℃，200- 230 r/min振荡培养3.5h。
3. 再将培养物进行第二次传代， 接种于5 mL GMII培养基中，野生型菌株BS501a按5% 接种量进行第二次传代，37℃，200-230 r/min振荡培养90 min。
4. 取1mL培养物，5 000 r/min室温离心5 min，用1 /10体积上清液重新悬浮细菌沉淀，即为枯草芽孢杆菌感受态细胞。
