DNA斑点和狭线印迹实验

1.  裁一张与多样过滤加样器一样大小的尼龙膜,将膜置于6×SSC的表面让其自然浸没。放置10 min。
 
2.  裁一张与多样过滤加样器一样大小的Whatman 3 MM 滤纸,用6×SSC浸湿。
 
3.  将Whatman 3 MM 滤纸置于多样抽滤加样器上,将膜放置于其上。将多样抽滤加样器按厂商说明书安装好,确保装置中不漏气。

4.  在DNA中加入20×SSC使其终浓度为6×SSC,体积为200~400 μl,在100℃变性10 min,然后置于冰中。
 
5.  连接吸液装置与多样抽滤加样器,每孔中加入500 μl 6×SSC。
 
6.  将DNA样品离心5 s,将样品加于各孔中,小心勿让吸头触及膜,让样品滤过。

7.  拆开多样过滤加样器装置,将膜置于一张浸过变性液的Whatman 3 MM 滤纸上,放置10 min。
 
8.  将膜转至一张浸过中和液的的Whatman 3 MM 滤纸上。放置5 min。

9.  将膜置于一张Whatman 3 MM 滤纸上,晾干。
 
10.  将尼龙膜置于可透过紫外线的塑料夹层中,将有DNA的一面朝下置于紫外透射仪上照射适当的时间以固定DNA。
 
11.  将晾干的膜夹于Whatman 3 MM 滤纸之间,室温下可保存数月。
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