DNA斑点和狭线印迹实验
1. 裁一张与多样过滤加样器一样大小的尼龙膜,将膜置于6×SSC的表面让其自然浸没。放置10 min。
2. 裁一张与多样过滤加样器一样大小的Whatman 3 MM 滤纸,用6×SSC浸湿。
3. 将Whatman 3 MM 滤纸置于多样抽滤加样器上,将膜放置于其上。将多样抽滤加样器按厂商说明书安装好,确保装置中不漏气。
4. 在DNA中加入20×SSC使其终浓度为6×SSC,体积为200~400 μl,在100℃变性10 min,然后置于冰中。
5. 连接吸液装置与多样抽滤加样器,每孔中加入500 μl 6×SSC。
6. 将DNA样品离心5 s,将样品加于各孔中,小心勿让吸头触及膜,让样品滤过。
7. 拆开多样过滤加样器装置,将膜置于一张浸过变性液的Whatman 3 MM 滤纸上,放置10 min。
8. 将膜转至一张浸过中和液的的Whatman 3 MM 滤纸上。放置5 min。
9. 将膜置于一张Whatman 3 MM 滤纸上,晾干。
10. 将尼龙膜置于可透过紫外线的塑料夹层中,将有DNA的一面朝下置于紫外透射仪上照射适当的时间以固定DNA。
11. 将晾干的膜夹于Whatman 3 MM 滤纸之间,室温下可保存数月。