金属硫蛋白的测定实验

MT是一种低分子量的蛋白质，含有大量的半胱氨酸，并对金属有较高的亲和性。

一、实验步骤

1. 组织按1:4（w/v）加入0.25 mol/l 蔗糖溶液，制备匀浆，18 000 g离心20 min（4℃）。

2. 取上清液0.5 ml，加入1.9 ml 0.03 mol/l Tris-HCl缓冲液（pH8.0）。

3. 再加入1 ml CdCl2（10ppm）混匀，室温孵育5 min。

4. 加入2%牛血红蛋白0.2 ml，沸水浴1 min，室温离心1 000 g，5 min。

5. 反复加入牛血红蛋白，加热、离心3次。

6. 在原子吸收分光光度计，用石墨法测定上清液Cd含量。

7. 组织MT含量按6 g原子Cd结合可分子MT计算。

8. 按Bradford 法测定上清液中的蛋白质含量。