天然培养基配制实验-鸡胚浸出液的制备

鸡胚浸出液内含有生长因子、大分子核蛋白和小分子氨基酸等,有刺激细胞生长作用,为早年培养使用的培养用液,现已被合成培养液所代替,但在某些研究中仍有一定应用价值。
1.  孵化

选健康受精鸡卵,置入37 ℃温箱孵化;箱内置有水皿,以保持箱内湿
度,每日翻动卵一次(180 度);

2.  处理

孵育至9—12 日,取出鸡卵置小烧杯中,令气室端向上,用碘酒和酒
精消毒蛋壳;

3.  取胚

用消毒剪剪除气室端蛋壳,小心拨开尿囊膜,用弯玻棒或变镊伸到胚
体颈下方,轻轻挑起鸡胚置入平皿中;

4.  清理

去掉胚眼、血块、尿囊膜等物;用BSS 冲洗鸡胚;

 
5.  粉碎

置入烧杯中用剪刀剪碎胚体后,再用组织研磨器研磨;或放入20—50 ml
注射器中(无针头)直接压挤入无菌小烧杯中;

6.  浸出

加入等量的Hanks 液,用吸管轻轻吹打均匀,密封后置37 ℃温箱中30 
分钟;

7.  分离

3000 转/分,离心30 分钟,无菌取上清分装入小瓶中,-20 ℃保存;
用前再离心一次,取上清使用。

注意事项
1.  全部操作过程要保持无菌,要剔除尿囊膜和眼睛等,以免对细胞产生不良作用。
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