含有目的基因真核表达 pEGFP-C1载体的构建实验-克隆法
在设计引物时,一对引物两端分别加了两个酶切位点,这两个酶切位点与pEGFP-C1 载体多克隆位点中的酶切位点相吻合,且位置和方向都合适。这样, 目的基因片段和pEGFP-C1 载体经双酶切后,由于酶切位点一致,在T4 DNA 连接酶的作用下就可以连接。
1. 双酶切纯化的目的DNA 片段和pEGFP-C1 载体。
反应体系：
反应条件： 37 ℃ 2 hrs 至过夜
2． 回收后电泳检测浓度， 然后进行连接反应。
反应体系：
反应条件： 室温2 hrs， 或者4 ℃过夜。
注意事项
10 ×Ligation Buffer 用之前要震荡混匀。
