细胞组分的化学反应实验-过碘酸雪夫反应(PAS)
组织、细胞的多糖、粘多糖及粘蛋白等都可用PAS法来显示,其化学基础是利用过碘酸的氧化作用,打开碳链形成醛,生成的醛基与Schiff试剂中的无色品红反应形成紫红色化合物。
一、方法
1. 取1~2 mm 厚的肝组织块,用Carnoy氏液4℃固定4~6小时。
2. 乙醇脱水、二甲苯透明。石蜡包埋,切片。
3. 用70%乙醇展片。
4. 脱蜡:二甲苯(1)5分钟→二甲苯(2)5分钟→100%乙醇5分钟→含1%火棉胶的乙醇液1分钟→70%乙醇1分钟。
5. 直接浸入过碘酸酒精液反应5~15分钟,经70%乙醇洗片刻。
6. 浸入Schiff氏酒精液反应15分钟。
7. 亚硫酸水洗三次,以洗去多余的非特异性结合的色素,以及扩散的染料。
8. 流水冲洗3~5分钟。
9. 蒸馏水洗。
10. 浸入Ehrlich苏木精复染20~30秒,使细胞核着色。
11. 脱水:95%乙醇3分钟二次→100%乙醇3分钟二次→二甲苯透明10分钟二次。
12. 加盖片镜检或树胶封固后镜检。
二、结果
细胞中呈紫红的颗粒即为糖原。