正常细胞常规核型的标本制备实验-肿瘤细胞的染色体标本制备
利用肿瘤细胞无限繁殖的特点,掌握其体外生长动态,取处于对数生长期的细胞便可获得丰富的分裂相。肿瘤细胞染色体异常包括两个方面:1. 结构异常 即在肿瘤细胞常出现的染色体畸变,包括双着丝点染色体、环状染色体、断裂的染色体、染色体裂隙及微小体等。2. 数目异常 由于肿瘤细胞分裂失去应有的调控,可出现亚二倍体、超二倍体和多一倍体数目异常现象。肿瘤细胞染色体制备技术在细胞生物学、医学遗传学的基础研究和临床诊断、愈后观察等方面均有广泛用途。
1. 以1.6× 105个/ml 细胞浓度将FL-60细胞接种于培养瓶内。
2. 48小时后以终浓度为0.04 μg/ml 的秋水仙素处理2.5小时,移入10 ml 离心管。
3. 其余步骤与淋巴细胞染色体制备相同。
4. 将长成单层的HeLa细胞按1:2传代进行培养,36小时后用终浓度为0.04 μg/ml 的秋水仙素处理3小时。
5. 按时终止培养,用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA混合消化液处理单层细胞,待细胞收缩变圆时,弃去消化液。
6. 加入少许低渗液将细胞从瓶壁洗脱,移入10 ml 离心管,加入预热37℃的低渗液至5~6 ml,在37℃处理25分钟。
7. 以下步骤同淋巴细胞染色体核型制备。
8. 结果:计数HeLa细胞和HL-60细胞的染色体数并寻找是否有畸变的染色体。