DNA印迹杂交分析实验
本方案适合于用100~1 000 bp 长的放射性标记的DNA探针对Southern转印、斑点及狭线印迹进行杂交分析。
1. 用6×SSC润湿带有固定了的DNA的膜。
2. 将膜的DNA面朝上置于杂交管中，ATP溶液的加入量为约1 ml/cm2 膜，在68℃杂交炉中滚动3 h。
3. 在预杂交即将结束时，于100℃将DNA探针变性10 min，置于冰中。
4. 将杂交管中的APH溶液倒掉，换上等体积的预热的APH溶液（68℃），加入变性探针，68℃滚动下杂交过夜。
5. 倒掉APH液，加入等体积的2×SSC/0.1%SDS，室温下滚动温育10 min。5 min后更换洗膜液。
6. 用等体枳的0.2×SSC/0.1%SDS替换上述洗膜液，室温下滚动温育10 min 后更换洗膜液
7. 如果需要，在42℃，0.2×SSC/0.1%SDS进行15 min 中等严紧度的洗膜2次。
8. 如果需要，在68℃，0.1×SSC/0.1%SDS进行15 min 高等严紧度的洗膜2次。
9. 倒掉最后的洗膜液，在室温下用2×SSC漂洗膜，并吸干多余的液体，用塑料膜包裹后放射自显影。
