细胞因子生物学活性检测实验-白细胞介素-1生物学活性检测

白细胞介素1是一种重要的细胞因子，主要由单核-巨噬细胞产生，IL-1不仅对多种免疫活性细胞有重要的调节功能，而且与发热、炎症发生以及某些疾病的病理变化有关。目前对IL-1产生水平的检测主要应用生物学活性检测的方法。

一、ConA刺激小鼠胸腺细胞检测IL-1 生物学活性

小鼠胸腺细胞在丝裂原刺激下表达IL-1受体，在有IL-1同时存在的条件下，IL-1 可协同丝裂原促T细胞的增殖作用。根据加入IL-1后增殖水平（³H-TdR掺入率）的增加可计算出样品中IL-1的活性单位，或计算出刺激指数。

二、应用EL-4 CTLL检测IL-1生物学活性

小鼠胸腺瘤细胞系EL4的某些亚克隆细胞表面具有高密度IL-1受体，在 IL-1诱导下产生高水平的IL-2，通过用IL-2依赖株CTLL-2检测IL-2的生物学活性，从而反映检测样品中IL-1的水平。

一、ConA刺激小鼠胸腺细胞检测IL-1生物学活性

1. 取6～8 周龄C57BL16小鼠，拉颈处死，无菌取胸腺置不锈钢网筛上，用注射器针蕊研磨成细胞悬液调整细胞数为1.5×10⁷ /ml

2. 细胞悬液内加入ConA，使终浓度为3 μg/ml，在96孔培养板中加100 μl（1.5×10⁶细胞）

3. 加入不同稀释度待测样品和IL-1标准品 100 μl/孔（ConA终浓度为1.5 μg/ml）， 37 ℃ CO₂孵箱 66 h

　　　　　　　　　　　　
4. 每孔加³H-TdR 0.5 μci， 37 ℃ CO₂孵箱 6 h

　　　　　　　　
5. 多头细胞收集仪收获于9999型玻璃纤维纸上

6. 烤干，移入液闪瓶中，加适量闪烁液，于液闪仪上测β计数

　
7. 计算

（1）从IL-1标准曲线上测得IL-1的活性单位

　　
（2）也可用刺激指数（SI）表示

　　实验组cpm
SI＝──────　×100％

　对照组cpm

二、应用EL-4 CTLL检测IL-1生物学活性

1. 用EL4细胞两步法检测IL-1活性

　　　　　　　　
（1）收集处于对数生长期的EL4细胞

（2）洗涤后，用1 ％FCS RPMI1640重悬细胞，并调整细胞浓度2×10⁶ /ml

（3）加处96孔板中，100 μl/孔

（4）加入不同稀释度的IL-1α或IL-1β，100 μl/孔，同时设1 ％FCS RPMI 1640对照

（5）5 ％CO₂37 ℃培养18～24 小时

（6）按终稀释度为1∶10～20转入另一块96孔板中

（7）用CTLL-2 检测IL-2活性、检测方法见"IL-2检测"

2. 用EL4细胞一步法检测IL-1活性

　　　　　　　　
（1）用5 ％FCS RPMI 1640调整 EL4细胞浓度至2×10⁵ /ml，CTTL-2浓度至4×10⁵ /ml

（2）加入96孔板中，两种细胞各加50 μl/孔

（3）加入不同稀释度的IL-1或待测样品，同时设EL4和CTLL-2细胞对照

（4）置5 ％CO₂，37 ℃培养24～28 小时后加入³ H-TdR，0.5 μci/50 μl/孔，继续培养6～8 小时

（5）收集样品，β计数

注意事项

一、ConA刺激小鼠胸腺细胞检测IL-1生物学活性

1. 不同品系小鼠对IL-1的反应性有差异，据国内资料报道以C57BL为好。

2. 不同周龄小鼠胸腺细胞对ConA反应性不一，一般选用6～8 周龄，小于5 周或大于10 周龄小鼠胸腺细胞对ConA反应不稳定。

　　
3. ConA促丝裂原作用要进行预试，一般采用亚适剂量。

二、应用EL-4 CTLL检测IL-1生物学活性

　
1. 在一步法检测IL-1时，其EL4细胞浓度不宜超过1×10⁴ /孔，血清终浓度应＜ 5％。

　　
2. 在二步法检测IL-1时，其EL4细胞浓度在2×10⁵ /孔时，转移上清稀释度不宜低于1∶8，其诱导时间应12～24 小时间为佳。诱导血清浓度应≤1％。

　　
3. 在检测经诱导的上清中IL-1时，应避免使用A23187，TPA和ConA等较强的能诱导EL4细胞产生IL-2的诱导剂来刺激IL-1的产生。