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SnapGene # Gibson Assembly®无缝克隆简述
什么是Gibson Assembly® 无缝克隆？
Gibson Assembly®是一种分子克隆方法，它允许在单个等温反应中连接多个DNA片段。它以其创建者Daniel G. Gibson的名字命名，后者是Codex DNA的首席技术官和联合创始人（维基百科，Gibson Assembly词条）。
它是一种不使用限制酶将片段插入质粒的常见方法。为了模拟这种方法，SnapGene可以提供一个直观的界面帮助科研人员了解整个克隆过程（如下图）。
为什么选择Gibson Assembly®
那么重点来了，Gibson Assembly®到底有什么优势呢？
简单来说，有以下几点：
1. 无需特定的限制位点。
可以连接几乎任何的两条片段，且无论顺序
2. 无缝克隆，连接的片段之间无接缝
3. 步骤更少，一管搞定
4. 可一次连接多个DNA片段
与常规的限制酶/重组DNA克隆相比，这种DNA组装方法具备许多优势。
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PCR后DNA片段无需限制酶切消化。但主干载体可以被消化或通过PCR合成；
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与传统的克隆方案相比，它更便宜，更快，因为它需要的步骤和试剂更少；
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在两个DNA片段之间没有保留限制性位点的接缝，但是当DNA聚合酶闭合双链和垂悬端之间的缝隙时，这一区域稍微会容易发生突变；
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通过one-step主混合酶，在一个单管反应中可以同时连接多达5个DNA片段；
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通过two-step反应，最多可以同时合并15个片段。在two-step法中，首先进行核酸外切酶和退火步骤。然后在第二步中添加DNA聚合酶和连接酶；
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Gibson Assembly®方法也可用于定向诱变（Site directed mutagenesis），以结合位点特异性突变，如插入，缺失和点突变；
SnapGene中的Gibson Assembly®
对于Gibson Assembly®，PCR扩增DNA片段以产生重叠末端。然后将扩增的产物与组装酶一起孵育，并将混合物转化为细菌。
SnapGene通过自动化引物设计简化了Gibson Assembly®过程。要计划Gibson Assembly®反应，只需选择你想要连接的DNA片段，SnapGene会自动化选择合适的引物来完成试验设计。
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