western bolt

暖暖岁月 2016-08-31 20:15:49 阅读: 1941

您好，我目前还没有悬赏金，刚注册的，请谅解。

我初学者刚做Western blot，遇到很多问题。请大家不吝赐教……我的载体是pET32a，载体上面包含2个His-tag。我的蛋白条带大小为10.5kd，载体上含有蛋白大小为19kd。我做western时：一抗1h，浓度为1：5000；二抗1h，浓度为1:20000.封闭时间为1h。上样量：蛋白6ul，marker3ul，电泳90min。

我用的一抗是：6His.His-tag mouse McAb。一抗和二抗都是师姐留下来的，我不知道western的一抗、二抗都是通用的还是有选择性的……请大家帮我指导一下，怎么改进自己的实验，是换一抗还是怎么回事？一抗怎么选择啊，根据自己的载体么？