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MTT检测细胞增殖
1. 实验原理
MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其吸光度值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于生物活性因子的活性检测、抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济、快捷。
2. 主要材料
· 细胞生长培养基
· 胰蛋白酶
· 胎牛血清
· PBS
· 青霉素-链霉素溶液（100X）
· MTT试剂
· DMSO
3.主要试剂配制
细胞生长培养液：-20℃保存，临用前按体积比配成含10% FBS和1%青霉素-链霉素双抗的完全培养液。
抗菌素溶液：青霉素-链霉素溶液（100X）加入培养基中100倍稀释。
PBS磷酸盐缓冲液：PBS粉剂用ddH2O定容至1000 ml，调pH7.2，121℃、30min高压灭菌，4℃保存备用。
5mg/ml MTT溶液：称取MTT 0.5g，溶于100 ml磷酸盐缓冲液（PBS）或无酚红培养基中，用0.22μm滤膜过滤除菌，4℃避光保存即可。
4.实验步骤
1). 取经不同处理的细胞，计数调整细胞浓度至1×105/ml。
2). 分别接种于96孔板中，每孔100 μl，每组细胞设3~5个复孔
3). 将96孔板移入培养箱中培养，细胞培养到适当时间
4). 每孔加入10μl 5mg/ml MTT溶液（注意不能产生气泡），在培养箱内孵育4~6h。
5). 4~6h后终止培养，小心吸去孔内培养液。
6). 每孔加入150ul DMSO，置摇床上低速振荡10min，使结晶产物充分溶解。在酶联免疫检测仪检测490nm处各孔吸光度值。
7). 同时设置调零孔（培养基、MTT、DMSO），对照孔（未经处理的细胞、培养基、MTT、DMSO）。
5. 实验结果
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