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炎症性肠病是基因、免疫、饮食、环境等多种因素参与的一种慢性疾病,随着现代生活方式的改变,炎症性肠病已经越来越普遍,炎症性肠病简单的可以分为溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)两种,其致残率和致死率呈现持续的上升趋势。为了研究相对应的治疗药物,迄今为止科学研究者已经开发出60多种动物模型,主要可以分为以下几类:
今天小虫跟大家分享几种较为常用的炎症性肠病的动物模型。
三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的炎症性肠病
(一)实验动物
本模型可用大、小鼠、兔等实验动物造模,本文小虫主要介绍在小鼠上的造模过程。
8周龄,24 g体重的C57BL/6小鼠
(二)试剂耗材
1、实验试剂
TNBS、橄榄油、无水乙醇、丙酮、1mL注射器、软管(可用胆汁插管的软管)、涡旋仪
2、试剂配制
首先将TNBS溶于水,配制成5%TNBS(w:v)水溶液,然后配制橄榄油与丙酮比例为1:4(v:v)的均匀混合溶液,使用该混合液将5%的TNBS稀释为1%的TNBS溶液(或首先将TNBS溶于水,配制成5%TNBS(w:v)水溶液,然后使用无水乙醇将5%的TNBS稀释为1%的TNBS溶液)。
3、造模
小鼠背部去毛(1.5x1.5 cm),取配制好的1%的TNBS溶液150 μL均匀涂抹在去毛位置,七天后,动物称重并标记,小鼠麻醉后使用1ml注射器通过软管将100 μL的1%TNBS缓慢注射进入小鼠直肠内(软管插入直肠的长度大约4 cm),小鼠倒立保持约1 min,然后将动物放置回笼内,造模后持续观察动物状态,通过DAI评分判定动物成模情况。
噁唑酮(Oxazolone)诱导的炎症性肠病
(一)实验动物
本模型可用大、小鼠实验动物造模,主要介绍在小鼠上的造模过程。
8周龄,24 g体重的SJL/J小鼠
(二)试剂耗材
1、实验试剂
噁唑酮、橄榄油、无水乙醇、丙酮、1mL注射器、软管(可用胆汁插管的软管)、涡旋仪
2、试剂配制
配制橄榄油与丙酮比例为1:4(v:v)的均匀混合溶液
用水稀释无水乙醇得到50%乙醇
称取一定量的噁唑酮,使用橄榄油/丙酮混合液溶剂,配置成3%的噁唑酮给药溶液或者用50%的无水乙醇配制得到1%的噁唑酮给药溶液。
3、造模
小鼠背部去毛(1.5x1.5 cm),取配制好的1%噁唑酮溶液(50%乙醇溶解)或者3%(橄榄油/丙酮混合液溶解)150 μL均匀涂抹在去毛位置,七天后,动物称重并标记,小鼠麻醉后使用1ml注射器通过软管将100 μL的噁唑酮给药溶液缓慢注射进入小鼠直肠内(软管插入直肠的长度大约4 cm),小鼠倒立保持约1 min,然后将动物放置回笼内,造模后持续观察动物状态,通过DAI评分判定动物成模情况。
双琥珀酰亚胺辛二酸酯(DSS)诱导的急性炎症性肠炎模型
(一)实验动物
8周龄,24 g体重的C57BL/6小鼠
(二)试剂耗材
1、实验试剂
DSS、水
2、试剂配制
称取一定量的DSS,使用水溶解,配置成2%-5%(w:v)的DSS水溶液,DSS溶液配制好完成后可在4℃避光保存。
3、造模
动物按照体重随机分组后,将动物水瓶内的水溶液更换为DSS水溶液,按照5ml/只*天进行准备,隔两天后更换新的DSS溶液(DSS给药时为day1,在day3、day5更换DSS溶液),第8天将DSS溶液更换为不含DSS的清水。造模后持续观察动物状态,通过DAI评分判定动物成模情况。
DSS诱导的慢性炎症性肠炎模型
1、实验试剂
DSS、水
2、试剂配制
称取一定量的DSS,使用水溶解,配置成2%-5%(w:v)的DSS水溶液,DSS溶液配制好完成后可在4℃避光保存。
3、造模
动物按照体重随机分组后,将动物水瓶内的水溶液更换为DSS水溶液,按照5ml/只*天进行准备,隔两天后更换新的DSS溶液(DSS给药时为day1,在day3、day5更换DSS溶液),第8天将DSS溶液更换为不含DSS的清水,清水摄取持续14天后,重复前面的步骤2-3次,造模后持续观察动物状态,通过DAI评分判定动物成模情况。
DAI评分标准
不同模型的临床适应症
不同的诱导剂对应不同的临床适应症,我们可以根据实验需要、技术能力选择相应的模型,DSS诱导的模型适应与炎症性肠炎的大多数适应症,且此模型操作简单,因此在临床前和临床研究中较为常用,但是此模型的成模率、模型稳定性差。
注意事项
1、试剂购买时尤为需要注意的是DSS,购买时需购买Da在36000-50000范围内的,国产试剂或者进口试剂均可。
2、软管购买时尽可能选用软管,胆汁插管的管子粗细合适,硬管较为容易插进直肠,软管较为费力。
以上即为几种比较常用的炎症性肠病模型啦,需要的小伙伴抓紧收藏吧,有什么想法也可以跟小虫一起探讨。
顺便提醒一下:肠炎模型除了造模剂之外,有时候跟动物的饲养环境有很大的关系,所以要尽量保证动物的饲养环境哦。
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