PCR 10ul体系拿出来是不是要稀释10倍才能用？

智能科研狗 2016-09-13 11:39:13 阅读: 3308

LM：PCR 10ul体系拿出来是不是要稀释10倍才能用？

wb-慌慌：如果含量不是太高，不稀释也可以的

LM：RNA都是500ug然后逆转录的，浓度怎样？

wb-慌慌：我是根据试剂盒说明书，一般用1.5ug或者2ug.cDNA没有再测浓度

LM:用2ug的话肯定得稀释了啊？还有复孔呢

熊XX：本来只有10ul

wb-慌慌：用2ug反转，得到cDNA 不用稀释，然后进行qPCR。我用的是20ul的体系，如果做的基因多，可以多反转录几管

金成一：哇～～你们做qPCR的cDNA用量这么大的啊我们都用的1ug转录，总量10ul，然后再稀释10倍，用其中3-5ul（具体视情况）来qPCR。是不是机器不一样或者用的试剂不一样导致用量差别那么大的？

LM：上面的和我的差不多，学姐稀释20倍，我昨天没稀释

金成一：研究室老师以前教的时候说qPCR的时候要保证那个斜率（我忘了那个陡坡急速上升的区域的切线值的叫法，哈哈）好像处于20到30 cycle之间（具体得回去确认下），所得的结果才比较准确，因为处于这个cycle区间，整个qPCR的曲线图才完整，可能各个研究室自己制订的设计不太一样吧，感觉差别有点大@LM 

 
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